【分析目的】建立檢測血液中乙醇含量簡便、準(zhǔn)確的方法。方法 以叔丁醇作為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測器對樣品進(jìn)行檢測，與平行操作的乙醇標(biāo)準(zhǔn)品比較，用內(nèi)標(biāo)法以乙醇對內(nèi)標(biāo)物的峰面積比進(jìn)行定量。結(jié)果 色譜圖上目標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)峰分離*，在0.01～10.0 g/L范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線線性關(guān)系良好。結(jié)論 頂空氣相色譜法測定血液中乙醇含量快速靈敏，能準(zhǔn)確定量。該方法可用于實際檢測分析。
血液中乙醇濃度的高低,是判定一個人清醒程度的重要指標(biāo)。目前國內(nèi)大多采用國標(biāo)法測定,即重鉻酸鉀氧化硫酸亞鐵銨滴定法。該法花費時間長,條件不易控制。由于血液中含有各種蛋白質(zhì)和膠狀物質(zhì)，比較黏稠,因此不能采用直接氣相色譜法測定。本實驗采用頂空氣相色譜法，通過對待檢血樣進(jìn)行適當(dāng)處理和色譜條件的摸索，從而對實驗方法有所改進(jìn)。

1  材料和方法

1.1  主要儀器  滕州中科譜分析儀器有限公司GC-2020型氣相色譜儀，半自動頂空進(jìn)樣器，N2000色譜工作站，氮氫空發(fā)生器一體機。

1.2  試劑  空白抗凝血，無水乙醇(色譜純)，叔丁醇（色譜純，內(nèi)標(biāo)物）。

1.3  試劑配置

1.3.1  乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液、叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液  用移液器分別準(zhǔn)確吸取無水乙醇1.26 ml（相對密度0.7893）、叔丁醇1.24 ml（相對密度0.803 7）于100 ml容量瓶中,用重蒸水稀釋至刻度,混勻，分別得濃度為10 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液、叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液。置4℃冰箱保存（可保存1年）

1.3.2  乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液、叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液  分別吸取一定量的乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液和叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用蒸餾水稀釋10倍，分別得濃度為1 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液和叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液

1.4  色譜條件和頂空條件  色譜柱 毛細(xì)管色譜柱，柱溫80℃，檢測室溫度220℃，進(jìn)樣溫度200℃. 頂空樣品溫度80℃，閥體溫度90℃，樣品管路溫度90℃。

1.5  樣品制備  吸取2份待測全血0.5 ml，分別加入樣品瓶中,加100 μl(1 g/L)叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液作為內(nèi)標(biāo)，用密封鉗加封鋁帽，密封好瓶塞,混勻，放入DK-300頂空進(jìn)樣器加熱位里面。

另取空白全血2份，根據(jù)待測血液中乙醇含量的多少（目測乙醇峰面積的大小），添加相應(yīng)的乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液（20 μg～2 mg），內(nèi)標(biāo)液按上述方法平行操作，作為已知對照。

樣品檢測  按下頂空進(jìn)樣按鍵，儀器自動負(fù)壓吸取樣品進(jìn)氣相色譜分析，同時頂空進(jìn)樣器給色譜工作一個采樣信號，色譜工作站開始記錄色譜數(shù)據(jù)。每個試樣進(jìn)樣2次。
  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作  將10 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液用重蒸水分別稀釋10、100、1000倍，得濃度分別為1、0.1、0.01 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，然后分別取0.05、0.1、0.2、0.4 ml的1 g/L乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，0.1、0.2 ml的0.1 g/L乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，0.1、0.2 ml的0.01 g/L乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，同時加入0.2 ml的1 g/L叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)工作液做內(nèi)標(biāo)，檢測后制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。見表1。
記錄與計算  記錄檢材及已知對照中乙醇及內(nèi)標(biāo)峰面積值，填入GC定量分析記錄表中，并計算出各檢材中乙醇及內(nèi)標(biāo)的平均峰面積。表1  標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)數(shù)據(jù) 乙醇添加量理論計算的乙醇濃度根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，計算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)：y=1.4062x+0.0268，r＝0.999

計算檢材中醇含量W(g/100 ml)

W=f×檢材中的醇峰面積平均值×內(nèi)標(biāo)添加量（μg）×100檢材中內(nèi)標(biāo)峰面積平均值×檢材量×1000

f=空白檢材中醇添加量×內(nèi)標(biāo)峰面積平均值空白檢材中內(nèi)標(biāo)添加量×醇峰面積平均值

計算相對相差（用來檢驗平行操作的穩(wěn)定性及數(shù)據(jù)的可靠性）：

相對相差（%）=｜W1-W2｜W×100

式中W1、W2為2份檢材平行定量測定的結(jié)果，W為2份檢材平均值。

結(jié)  果
測定的色譜圖  見圖1、2。

該條件下目標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)分離*，（3.39±0.5）min處為乙醇目標(biāo)峰，（10.0±0.5）min處為內(nèi)標(biāo)峰。

2.2  線性關(guān)系  在確定的*試驗條件下,對不同濃度的乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測定,其回歸方程為y=1.4062x＋0.0268,r=0.999。在乙醇濃度為0.01～10.0 g/L范圍內(nèi)，血液中乙醇含量與相應(yīng)的峰面積值呈良好的線性關(guān)系，測定限為0.01 g/L。

如有需要測定血液中乙醇含量可

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